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PCR亚博yabo2014分区能杜绝污染吗?分3区还是4区?

发布时间:2020-05-18

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\       目前PCR亚博yabo2014建设要求至少应该分为三个区域,即试剂准备区、核酸制备区和PCR扩增区,如果要对扩增产物进行开放性鉴定,如杂交、电泳等操作,原则需要增加第四个区。亚博yabo2014分区的主要目的是避免纯化核酸和扩增产物逆向污染前一个区域,但多年的经验表明,无论是三区还是四区的设置,似乎都没有完全杜绝亚博yabo2014污染的发生。反而罗氏COBAS“一体机”引入亚博yabo2014后,乙肝20IU/ML的敏感性能够长期保持良好,极少有系统污染的发生,亚博yabo2014分区的意义受到一定程度的质疑!仔细对比就不难发现,罗氏COBAS并不能避免样本交叉污染,因为这一环节是由亚博yabo2014工作人员完成的,是管理问题而不是检验问题;COBAS在核酸制备过程中,经常发生核酸纯化的Tip头吹出气泡和气泡破裂的情况,虽然这种情况并不常见,但核酸纯化和试剂分配共用一个空间是事实,有研究报道,COBAS检测28个样本,有2个污染(JCM, 2011,P2854-2858),我们也从21个阴性样本中发现一个污染,COBAS的污染就像普通亚博yabo2014一样存在,但令人惊奇的是,从未像普通亚博yabo2014那样发生系统性污染,但有一点可以说明,气溶胶或许并不是亚博yabo2014污染的主要原因。

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分析我国大多PCR亚博yabo2014的检测项目不难发现,近80%的亚博yabo2014采用荧光PCR试剂盒进行临床检测,即这部分亚博yabo2014不存在开放性核酸鉴定环节,试剂工作液的配制多在核酸制备完成后进行,依存“试剂配置与PCR扩增之间的时间越短越好”的原则,多数亚博yabo2014的试剂配制均在核酸制备室完成,也就是说,试剂配制室的存在基本被忽视,了解了罗氏COBAS的操作方式,这种做法便显得无可厚非!核酸制备完成并加入PCR反应液后,移管到扩增室,由于采用封闭核酸鉴定的方法,这样扩增室的设置也同样显得多余!以罗氏COBAS为镜,临床PCR亚博yabo2014是否分区便显得无足轻重了!但这并不是说PCR亚博yabo2014不需要分区,因为仪器自动化控制的机械臂,与亚博yabo2014操作人员的操作习惯和对规则的执行力是有着本质差别的!这或许就是经过严格分区后的亚博yabo2014,污染同样存在的主要原因!
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那么PCR亚博yabo2014究竟应如何建设才能有利于污染的预防和有效清除?

其实污染就是PCR扩增管中掺入了原来样本不存在的扩增核酸,那么这个不受欢迎的核酸是怎么来到PCR扩增管里的?如果排除试剂盒、仪器和人员操作等环节,核酸气溶胶和洒落的样本与核酸的清除是亚博yabo2014建设应该重点考虑的环节。

 

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亚博yabo2014的建设首先要有通风设置,通风是PCR亚博yabo2014建设应该考虑的基本条件,如果采用封闭彩钢板建设的亚博yabo2014,应进行压差设置,即自试剂准备室、核酸制备室到扩增室依次呈负压,但清洁新风应从室外引进,新风过滤网应定期更换,否则便成为污染的来源。其次是亚博yabo2014墙面和地面具有防水功能,也就是墙面和地面可以水洗!每个房间设置地漏,方便“亚博yabo2014的清洁”,当亚博yabo2014污染发生时,即可使用“水洗亚博yabo2014”的方法有效清除污染,清除过程使用的是0.2%有效氯溶液,它不但有效断裂核酸片段,而且还具有淬灭荧光基团,有利于PCR亚博yabo2014荧光本底的去除。但过量使用反而会影响试剂扩增效率。消毒液清洗后应该使用自来水或清洁水进行再次清洗,特别是设备表面。亚博yabo2014空气中的污染清除,可以用有效氯溶液进行喷雾。

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总之,PCR亚博yabo2014过度分区和分割,不但浪费空间,影响人员操作,常常不利于污染物的扩散和清除,相信在不久的将来,随着试剂盒技术的发展,一个房间可实现PCR的试剂准备、核酸纯化和PCR扩增的所有功能,而污染的预防和清除也会显得十分简单。
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